磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）生化測(cè)試試劑盒

測(cè)定原理：根據(jù)Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性高低。

需自備的儀器及用品:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加

入6mL蒸餾水充分混勻待用。

試劑三：液體2mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。用時(shí)加入3mL雙蒸水，4℃保存。

試劑五：粉劑×1瓶,4℃保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。

試劑六：粉劑×1瓶,4℃保存。用時(shí)加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。

試劑七：液體25mL×1瓶，室溫保存。

試劑八：10mmol/L標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液10mL×1瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑八20倍稀釋，即取0.1mL試劑八加1.9mL蒸餾水充分混勻。

　定磷劑的配制：按H2O:試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）生化測(cè)試試劑盒

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

樣品酶液的制備：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。